Department of Biomedical Sciences, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York, USA.
Traducido por: M. M. Wanke, Facultad de Ciencias Veterinarias, Area de Teriogenologia, Universidad de Buenos Aires, Capital Federal, Argentina (29-Jan-2002).

Introducción
Muchos aspectos de la preñez canina son únicos entre las especies domésticas veterinarias. Por lo tanto, cuando se brindan servicios clínicos tales como el manejo reproductivo y el seguimiento de la preñez es esencial una comprensión del curso del tiempo y de las correlaciones clínicas de la ovulación, fertilización y desarrollo fetal y embrionario y de los cambios en la fisiología materna específicos de la preñez [1-4]. Esta comprensión es también importante para tomar decisiones en los casos de fallas en la concepción, cesárea programada y distocia. Un hecho importante es que la duración de la gestación y los eventos que durante ella ocurren, son muy repetibles y predecibles cuando se observan con relación al momento de la ovulación o del pico de hormona luteinizante (LH) que la precede (Tabla 1 y Tabla 2). Esto es así a pesar del hecho de que el intervalo normal entre el servicio y el nacimiento puede variar entre 55 y 70 días.

Tabla 1. Acontecimientos y correlaciones clínicas de la preñez canina durante el período de implantación y detección de la preñez, con relación a los días del pico preovulatorio de LH.

Días Acontecimientos y cambios en los parámetros

-25 a -3 Principio del proestro (celo) - promedio día -9
-3 a +6 Principio del comportamiento estral - promedio día 0 a 1
-3 to +8 Primera aceptación de penetración y servicio - promedio día 1
-3 Primer día en que un servicio único ha sido fértil

0 Pico preovulatorio de LH. Momento del mayor aumento en la LH sérica
0 Aumento de la progesterona desde niveles de 0.3-0.8 ng a niveles de 0.9 a 3.0 ng/ml
0 Principio del pico de fertilidad para servicios únicos dados por perros de alta fertilidad
2 Ovulaciones a 38-58 h después del pico de LH
3 Ovocitos primarios en el oviducto. Posible penetración por el espermatozoide
4 Ovocitos presumiblemente aún sin corpúsculo polar o pronúcleo femenino
5 Maduración de ovocitos en distal del oviducto. Fertilización completada si ya hubo servicio
6 Servida: embrión de 1-2 células. No servida: ovocitos maduros aún fértiles
7 Servida: embrión de 1-2 células. No servida: la viabilidad de algunos ovocitos disminuye o se pierde
8 Servida: embrión de 4 células. No servida: un servicio tardío resulta en camadas pequeñas o falta de concepción
9 Servida temprano: embrión de 4-8 células. Servida tarde: embrión de 4 - 8 células. Servicio raramente fértil
10 Embriones de 8-16 células en oviducto
11 Embriones en oviducto: mórulas de 16 - 32 células
12 Se encuentran mórulas dentro de la zona pelúcida en los cuernos uterinos
13 Migración intrauterina de blastocistos entre los cuernos
14 Continúa la migración dentro del útero
15 La ecografía no detecta ninguna diferencia debida a la preñez
16 Agrandamiento de los embriones y adelgazamiento de la zona pelúcida
17 El agrandamiento de los embriones continúa y la migración cesa
18 Los blastocistos encerrados en la zona se encuentran en una vesícula uterina > de 1 mm de diámetro, detectable por ultrasonografía
19 Vesículas uterinas visibles por ecografía. Embrión + zona pelúcida. Revestimiento mucoso
20 Expansión del embrión en vesículas uterinas mayores de 2 mm x 3 - 6 mm. Zona ausente, revestimiento delgado
21 El blastocisto toca pero aún no se adhiere al endometrio. No se puede extraer por lavado.
22 Agrandamiento uterinos visibles macroscópicamente alrededor del día 21 - 23. Embrión adherido. Comienza la invasión.
23 La invasión del trofectodermo al endometrio continúa. La ecografía detecta el embrión
24 Los latidos cardíacos fetales pueden verse en la ecografía. Distensiones uterinas palpables de 1 cm
25 Detección ecográfica de latidos cardíacos
26 Aumento en suero de relaxina y proteínas de fase aguda (fibrinógeno) en algunas perras
28 La ecografía detecta masas de placenta zonaria. La relaxina es típicamente detectable

Tabla 2. Eventos y correlaciones clínicas de la preñez canina desde la implantación al parto con relación al pico preovulatorio de LH.

Días Acontecimientos y cambios en los parámetros

22 Distensiones uterinas visibles macroscópicamente por el día 21 - 23. Embrión adherido. Comienza la invasión
23 La invasión del endometrio por el trofectodermo continúa, la ecografía detecta al embrión.
24 Los latidos cardíacos pueden ser visibles por ecografía. Distensiones uterinas palpables de 1 cm
25 Detección por ecografía de latidos fetales con equipos de alta resolución
26 Aumento en la relaxina sérica y proteínas de fase aguda (fibrinógeno) en algunas perras
28 La ecografía detecta masas de placenta zonaria. Relaxina típicamente detectable. Latidos cardíacos claramente visibles
30 Distensiones uterinas palpables de 3 cm. Palpación fácil. La prolactina aumenta
32 Elevados niveles de prolactina detectables
34 Anemia materna típicamente evidente
36 La palpación demuestra masas uterinas menos distintivas. Por ecografía se detectan las yemas de los miembros
38 El embrión es todavía más pequeño que la banda placentaria
42 El embrión comienza a ser más grande que la banda placentaria
46 Primera detección del cráneo y columna vertebral por radiografía. Agrandamiento evidente de la glándula mamaria
50 Niveles de proteínas de fase aguda cerca del nivel máximo
54 Los miembros y la pelvis detectables por radiografía
56 Los dientes aun no son visibles por radiografía
58 Miembros y pelvis, posiblemente dientes detectables por radiografía
60 Se detecta fácilmente los dientes ahora o el día siguiente por radiografía. La progesterona está por encima de 3 ng/ml
62 La progesterona comienza a descender. Comportamiento de nidación, el decaimiento comienza dentro de los próximos dos a cuatro días
63 Parto temprano, gestación corta pero no anormal
64 Parto temprano, gestación normal. Progesterona debajo de 2 ng/ml 12 - 24 hs pre-parto
65 Promedio de fecha de parto. Fecha de parto predicha
66 Parto tardío, rango normal
67 Parto muy retrasado pero no anormal, signos de distocia ausentes
68 Parto retrasado si no hay conducta de nidación o parto

Fertilización y duración de la gestación
La razón por la cual la duración de la gestación es relativamente constante cuando se determina a partir del día de la ovulación, pero muy variable cuando se cuenta desde el día del servicio, se comprende parcialmente. En la gran mayoría de las perras, el parto ocurre 64, 65 o 66 días después del pico ovulatorio de LH [1]. Este pico representa la liberación aguda de LH de la hipófisis en proestro tardío o estro temprano. El pico de LH desencadena la ovulación. Ya que el día del pico de LH puede medirse o estimarse con precisión razonable, puede ser útil cronometrar los sucesos a partir de ese día, usándolo como punto de referencia (Día 0). Una gestación de 64-66 días medidos desde el pico de LH hasta el parto es lo mismo que un intervalo de 62, 63 o 64 días entre la ovulación y el parto, ya que se estima que la ovulación se produce 2 días después del pico de LH [4].

En cambio, usando el día del servicio como punto de referencia, como se observa en casos de un solo servicio o inseminación, el parto puede ocurrir tan pronto como 56 días o tan tarde como 68 días después. Del mismo modo, puede encontrarse una gran variación en la duración aparente de la gestación cuando se cuenta desde el primero o el último de varios servicios, los extremos encontrados varían entre sí unas dos semanas. Por ejemplo, si una perra es llevada a un macho agresivo y forzada a ser servida a partir de 3 a 5 días antes del pico de LH, el intervalo del primer servicio al nacimiento puede ser hasta de 69 a 70 días, y en raras ocasiones donde la perra aun es fértil 9 o 10 días después del pico de LH y es servida en ese momento, el intervalo entre el servicio y el nacimiento puede ser tan breve como de 55 ó 56 días.
Parte de la explicación es que el semen del perro puede, en algunas ocasiones, sobrevivir en el tracto de la perra hasta 7 o incluso 9 días y continuar siendo fértil en el sentido de ser capaz de lograr una fertilización y resultar en una preñez. Es posible que en perros como en otras especies, muchos espermatozoides mueran o pierdan su fertilidad después de 1 ó 2 días. Sin embargo, el número que permanece fértil por dos días es suficientemente alto en perros como para que la fertilidad y fecundidad no sean afectadas en servicios realizados en el día del pico de LH, dos días antes de la ovulación. Por lo tanto, en estas preñeces el semen sobrevive dos días antes de penetrar potencialmente al óvulo y la cromatina debe sobrevivir otros 2-3 días para funcionar como pronúcleo masculino que se fusiona con el femenino para formar el zigoto de 1 célula.

La fertilidad disminuye en servicios anteriores al pico de LH (por ejemplo 3 o más días antes de la ovulación). Sin embargo, se han obtenido camadas de servicios forzados, servicios con machos agresivos e inseminaciones artificiales con semen fresco tan precozmente como 3-5 días antes del pico de LH. El depósito de semen en estos casos fue de 5 a 7 días antes de la ovulación y por lo menos 7 a 9 días antes de la maduración de los ovocitos.

Otra parte de la explicación de la gran variaci_f3n encontrada en la duración de la gestación se apoya en el momento de maduración del ovocito en esta especie. En perros (y zorros), a diferencia de la mayoría de las otras especies, los huevos están todavía inmaduros cuando son ovulados (es decir son todavía ovocitos primarios) y no completan la meiosis y se hacen secundarios (maduros) hasta probablemente 2.5 a 3 días después de la ovulación. Un óvulo debe ser un ovocito secundario maduro conteniendo un pronúcleo femenino antes de que el pronúcleo masculino pueda fusionarse con él para completar el proceso de fertilización mediante la formación del núcleo de un embrión de una célula. En perras servidas precozmente, probablemente un espermatozoide penetre cada óvulo muy poco tiempo después de haber sido ovulado, pero una vez formado el pronúcleo masculino, este debe esperar la maduración del óvulo. En perras servidas tarde, el pronúcleo femenino del óvulo maduro está listo para fusionarse con el masculino en cuanto este se forme después de la penetración del espermatozoide.
Se ha estimado al menos de dos maneras que el intervalo necesario para la maduración del ovocito después de la ovulación es de 3 días. Una está basada en la estimación de cuanto tiempo después de la ovulación, varios servicios con machos diferentes pueden originar crías de diferentes padres. Otra es la estimación de cuanto tiempo después de la ovulación puede obtenerse una preñez mediante una inseminación artificial con semen pos-descongelado de vida corta.

Debido a este fenómeno de maduración demorada del ovocito, cuando las perras son cubiertas por diferentes machos antes de la ovulación pueden fácilmente dar a luz camadas de padres distintos.
Programación de la fertilización, fertilidad y fecundidad
De este modo, parece que la fertilización hasta el punto de fusión nuclear, no puede llevarse a cabo antes de unos tres días después de la ovulación (y por los tanto 5 días después del pico de LH). Siguiendo la maduración del óvulo al estadío de ovocito secundario, el período de vida fértil de un ovocito no fertilizado puede ser en algunas ocasiones de solamente uno o dos días, ya que la fertilidad declina si los servicios se demoran hasta 4 y 5 días después de la ovulación (o sea 6 y 7 días después del pico de LH). Es decir que tanto el tamaño de la camada como el índice de concepción disminuyen cuando los servicios se realizan más de 2 días después de la maduración de los ovocitos. De este modo, con un corto periodo de tiempo de dos días para que ocurra la fertilización óptima, es razonable que la duración de la gestacið3n sea constante cuando se mide con relación al día del pico de LH o al día de la ovulación. Sin embargo, algunas perras pueden tener uno o más ovocitos fértiles que sobreviven hasta 7 días después de la ovulación lo que corresponde a 9 o 10 días después del pico de LH. Mientras que la fertilidad es típicamente baja con servicios tan tardíos, cuando se producen preñeces, la duración de la gestación es habitualmente igual que en las otras perras, es decir que el parto ocurre 64-66 días después del pico de LH (y 62-64 días después de la ovulación). La situación anterior es la base de casos bien documentados de perras con gestaciones de duración excepcionalmente corta, pariendo a los 55 ó 56 días después del apareamiento. La razón de por qué la duración real de la gestación no es mayor en estas perras servidas tardíamente no está clara, pero hay dos razones probables. Primero, hay alguna evidencia todavía no publicada de que los óvulos fertilizados dos días después de la maduración, se dividen algo más rápidamente que los penetrados por los espermatozoides antes de madurar (Tutsui, 1999, comunicación personal). Segundo, es probable que el momento de la implantación esté en parte relacionado con el momento de los cambios en las concentraciones séricas de estrógenos y progesterona. Estas no varían con el momento de servicio o fertilización o la tasa de división celular temprana en el embrión. Es probable entonces que haya un lapso de tiempo muy breve durante el cual el útero es receptivo a la implantación. Se estima que la implantación se produce en el día 22-23 después del pico de LH [6]. En algunos casos de servicios muy tardíos, hay informes anecdóticos donde debido al reducido tamaño de la camada resultante, la señal fetal para desencadenar el parto es débil y el parto se demora por 1-2 días, con un aparente aumento de la duración de la gestación. Sin embargo, no se ha publicado evidencia documentada de esto.

Clínicamente es útil considerar que la duración de la gestación en las perras es en la mayoría de los casos 64-66 días, cuando se mide como el intervalo desde el pico de LH hasta el parto. Sin embargo es importante darse cuenta de que intervalos de 63 a 67 días han sido observados en algunas preñeces normales no complicadas y no deberían ser consideradas fuera de lo común. Además puede haber un error de hasta 1 día en estimar el pico de LH. No obstante, estimar el día del nacimiento como 65 días después del pico de LH puede ayudar a los propietarios de los perros y orientar en el manejo de la asistencia a los partos. Cronometrar los principales acontecimientos de la preñez a partir del pico estimado de LH puede también ayudar en el seguimiento de la preñez y en el manejo de los servicios que se pueden brindar durante la misma (Tabla 1 y Tabla 2).

Principales acontecimientos de la preñez
Algunos de los acontecimientos más importantes de la preñez en la perra son los siguientes, basados en revisiones bibliográficas e informes previos [1-8]. Los embriones entran al útero alrededor del día 11; se implantan alrededor del día 22-23; la placenta secreta relaxina desde el día 24-28 hasta el parto; la secreción de prolactina aumenta por el día 30 hasta el parto y durante la lactancia; alrededor del día 30-35 aparece una anemia normocítica fisiológica evidente que alcanza su máximo (con un hematócrito reducido a un 30-40%) al final de la gestación; la secreción de progesterona aumenta ligeramente desde el día 30 hasta el parto, probablemente debido al incremento en la secreción de prolactina ya que la misma es luteotrófica; un aumento simultáneo en el metabolismo y excreción fecal de la progesterona hace que sus concentraciones séricas no sean mucho más altas que en las perras no preñadas; un aumento agudo de prostaglandinas antes del parto hasta alcanzar concentraciones luteolíticas y una rápida disminución de la concentración de la progesterona durante las 24 h anteriores al parto; un comportamiento pre-parto de nidación, cavar pozos, aislamiento, actitud defensiva y también una caída concomitante de la temperatura rectal de 1ºC o más antes del parto; una descarga de loquios verdes normales antes, durante e inmediatamente después del parto, el nacimiento de cachorro(s) que en una camada promedio tarda de 4 a 24 h.

Cronometraje de los acontecimientos de la preñez
El transcurso de los eventos de la preñez ha sido cuidadosamente estudiado y parece ser relativamente constante y predecible en las perras si se cronometra correctamente. El cronometraje puede realizarse basado en lo siguientes datos listados en orden de confiabilidad:

Día del pico ovulatorio de LH determinado midiendo la concentración sérica de LH;

Día del pico de LH estimado por la detección del aumento concomitante de progesterona sérica determinada por RIA o ELISA cuantitativo;

Día de la ovulación determinado por ecografía;

Día del pico de LH y/o de ovulación, determinado mediante test de ELISA comercial para progesterona;

Día del pico de LH determinado mediante test comercial de LH en orina;

Día del pico de LH y/o ovulación basado en el fin del estro (metaestro o diestro) determinado por cambios en la citología vaginal.;

Día de la ovulación basado en cambios en el aspecto de la mucosa vaginal observada por vaginoscopía,

Día de ovulación basado en el seguimiento del ablandamiento preovulatorio de la vulva y el periné.

Transcurso de los acontecimientos de la gestación y puntos clínicos claves

Cuando el día del pico preovulatorio de LH ha sido determinado directamente o basado en la concentración de progesterona obtenida por radioinmunoensayo a partir del incremento inicial de la progesteronemia en muestras recogidas a diario o con más frecuencia, la secuencia de eventos que ha sido observada o estimada ha sido característicamente constante a través de los estudios y se resume en la Tabla 1 y Tabla

2. Sin embargo, han habido algunas variaciones y diferencias menores entre estudios cuando estos han sido realizados usando un valor absoluto pre definido de progesterona para estimar el momento de la ovulación.

Se predice que el día del parto ocurrirá 65+/-1 días después del día estimado del pico preovulatorio de LH con un razonable grado de precisión, si se ha puesto el esfuerzo en la estimación precisa del día del pico de LH. El cronometrado de otros acontecimientos es también predecible (Tabla 1 y Tabla 2).

Parto inminente y cesáreas programadas
Las cesáreas programadas o por elección probablemente pueden ser realizadas en forma segura pasados 63 días después del pico de LH. Sin embargo, no hay informes de investigación clínica sobre este hecho y además es importante tener en cuenta el bienestar de los cachorros. En razas no braquicefálicas, esperar hasta el día 65 o 66 puede resultar en un parto espontáneo y evitar la necesidad de una cesárea. En razas braquicefálicas, puede ser importante comenzar la cirugía antes que se inicie el parto, aunque no hay datos publicados de la incidencia de problemas durante el parto normal en estas razas. La cesárea por elección y de emergencia es extremadamente segura como se realiza en Estados Unidos de Norte América o en Canadá [5]. La mortalidad de cachorros es la misma o posiblemente menor que la observada en partos naturales y la mortalidad de las perras es de un 1%. No ha sido publicada la posible utilidad de la administración de dexametasona pre-parto, pero hay evidencia anecdótica de su uso exitoso en algunas prácticas. La intención es aparentemente simular el aumento natural en corticosteroides tal como ocurre en el parto normal. También hay evidencia anecdótica que la incidencia de inmadurez, irregularidades de latidos fetales y muertes neonatales pueden reducirse confirmando primero que la perra está a término mediante el dosaje de progesterona sérica, pero no hay reportes publicados. Es razonable sugerir que en el momento de la cirugía la progesterona debe estar baja, y preferiblemente cerca de o debajo de 2 ng/ml, es decir en los niveles esperados dentro de las 24 horas anteriores al parto natural. Los mismos kits de ELISA de progesterona utilizados para monitorear la ovulación pueden ser utilizados para este fin.

La progesterona sérica alcanza su pico de concentración entre los días 15 y 30 y puede alcanzar picos tan altos como 80 ng/ml (240 nmol/L) o tan bajos como 15 ng/ml (45 nmol/L). En gestación avanzada, alrededor de los días 50 - 60, la progesterona puede estar tan alta como 15 ng/ml (45 nmol/l) o tan baja como 2 ng/ml (9 nmol/l). La progesterona típicamente disminuye de 4 - 5 ng/ml (12 - 15 nmol/L) a cerca de o por debajo de 2 ng/ml (6 - 7 nmol/L) durante las 24 hs antes del comienzo del parto. Hay una disminución concurrente de la temperatura rectal pre-parto que es más fácilmente observada cuando se mide dos o tres veces en el día, comenzando varios días antes del parto. Muchos médicos veterinarios piden rutinariamente a los propietarios que tomen y anoten la temperatura rectal de sus perras 2 a 3 veces por día, comenzando 1 semana antes de la fecha prevista para el parto.

Manejo y programación de gestaciones cuando no se conoce el día de la ovulación
Se puede estimar la etapa de la gestación basándose sobre varios parámetros. En perras servidas recientemente, un frotis vaginal puede determinar si la transición del estro al metaestro (diestro) ha ocurrido. Esta transición o cambio en la composición del frotis ocurre típicamente 7 a 9 días después del pico de LH, y por lo tanto cerca de 57 días pre-parto. Esto no es completamente preciso ya que el cambio a metaestro o diestro en el frotis vaginal puede ocurrir a partir de los 6 días y hasta los 11 días (Concannon y Shille, observación no publicada). En la gestación temprana, el tamaño de las distensiones uterinas palpables a través del abdomen puede ser útil, midiendo típicamente 1 cm en los días 22-24, y 3 cm en el día 32 después del pico de LH.

Los estudios por ultrasonido en tiempos predeterminados con relación al pico de LH, han permitido describir varios puntos claves en el desarrollo fetal que pueden ser utilizados para estimar la etapa de la gestación cuando se desconoce o no se puede estimar acertadamente el día del pico de LH [7-10]. A través del ultrasonido se puede detectar el latido cardiaco pero depende del equipo utilizado, de la experiencia del técnico y de la preparación del abdomen para el examen. Sin embargo, el latido cardiaco no puede ser detectado antes del día 23, y puede ser detectado con cualquier equipo alrededor de los días 28 - 30. La longitud fetal en relación con la longitud de la banda placentaria puede determinarse por ultrasonido y relacionarse con los días 40 - 42, cuando la longitud de la corona a la grupa fetal sobrepasa la longitud de la banda placentaria. Otros detalles sobre criterios establecidos durante el examen de ultrasonido han sido publicados, incluyendo la primera detección de los miembros en los días 33 - 35, visualización de ojos, riñones e hígado en los días 39 - 47, y visualización del intestino en los días 57 - 63. El cráneo fetal no puede ser visto por radiografía antes del día 45 y puede ser visto casi siempre alrededor de los días 47 - 49; los huesos pélvicos no pueden verse antes del día 53 y normalmente pueden ser vistos en el día 57; los dientes fetales no pueden ser vistos antes del día 58 pero pueden ser vistos alrededor del día 63