Leptospirosis en caninos - estado actual (Last Updated: 19-Jul-2001 )
P. L. McDonough

Department of Population Medicine and Diagnostic Science, Diagnostic Laboratory, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York, USA.

Traducido por: J. N. Borman Maiztegui, Córdoba, Argentina. (25-Sep-2003).

Introducción
La leptospirosis es una enfermedad bacteriana causada por especies patógenas del Género Leptospira. La enfermedad ocurre mundialmente en numerosos huéspedes animales, incluyendo al perro. La enfermedad en el canino se presenta como una infección aguda de riñón e hígado y, a veces, como una septicemia. La enfermedad crónica renal es una secuela común de infección y los abortos pueden ocurrir en hembras preñadas. Debido a que varios aspectos de la infección no se entienden bien, existe la posibilidad que le enfermedad en perros no sea diagnosticada. Eventos recientes en el Noreste de USA han colocado a la leptospirosis a la cabeza de la lista de diagnósticos diferenciales para perros que se presentan con signos de enfermedad aguda de hígado y/o riñón. Mientras que los métodos diagnósticos se han perfeccionado a lo largo de los años, la mayoría son relativamente insensibles. La información acerca de la leptospirosis es aun más complicada debido a grandes cambios en la clasificación taxonómica del Género Leptospira. Para poder comprender patrones cambiantes de la enfermedad en los perros, es necesario reconocer que esta infección re-emergente está influenciada por los ciclos de infección en animales salvajes, desde donde la infección podría diseminarse hacia poblaciones de animales domésticos. Otros factores que afectan el patrón de enfermedad en perros son la historia de vacunación y el uso de antibióticos. Esta monografía sobre la leptospirosis en caninos da importancia a los hallazgos recientes de la enfermedad en perros, y desafía a los veterinarios a que aprendan más sobre esta seria enfermedad la cual afecta a ambos, animales y hombres.

Leptospira - Supervivencia medioambiental, microbiología, y taxonomía
La Leptospira no se multiplica fuera del huésped y su supervivencia depende de las condiciones medioambientales en las cuales las leptospiras se encuentren, por ejemplo, condiciones del suelo y agua. La Leptospira es altamente susceptible a la desecación y a los cambios de pH - pH<6 y pH>8 son inhibidores; temperaturas < 7 - 10ºC (44.6 - 50ºF) y temperaturas > 34 - 36ºC (93 - 96ºF) son nocivas. Los organismos de Leptospira sobreviven hasta 180 días en suelos húmedos, por varios meses en superficies acuosas y sobreviven aun mejor en agua estancada que en movimiento. La fuente de infección para animales es ya sea por contacto directo con orina infectada, material ó fluidos fetales y placentarios, descargas uterinas, ó por contacto indirecto con el ambiente contaminado. Una mayor incidencia de la enfermedad ocurre en suelos con pH alcalino, durante las estaciones húmedas (áreas de alta precipitación), en áreas bajas donde es susceptible que la lluvia corra, climas cálidos y húmedos, áreas con abundante superficie de agua generando campos pantanosos y áreas barrosas. Además, perros en patios cercados pueden exponerse a orina de animales salvajes, incluyendo roedores; perros que son ejercitados mediante caminatas en parques y aquellos que vagan en el campo ó nadan en estanques ó lagunas y en arroyos con poco y lento caudal están en un mayor riesgo a la exposición de la leptospirosis. Los perros como razas de caza, animales de exhibición, y todo perro con acceso a estanques ó lagunas ó arroyos con poco y lento caudal se encuentran en mayor riesgo que mascotas caseras.

Etiología
Las Leptospiras son bacterias aeróbicas ó microaerofílicas Gram negativas y miembros del Orden Spirochaetales. La Leptospira no se tiñe bien con la tinción convencional de Gram, pero son fácilmente visibles con tinciones de anticuerpos fluorescentes (FA) de preparados tisulares ó sedimento urinario, la tinción de plata de Warthin-Starry ó tinción de tejidos fijados por inmunohistoquímica. Su morfología microscópica es un espiral a menudo con ganchos visibles en cada extremo de la célula bacteriana (Fig. 1).

Figura 1. Morfología típica de leptospiras. Microfotografía electrónica. L. pomona x20,000.

La temperatura óptima de crecimiento es 30ºC y el tiempo para obtener una nueva generación es de 7 a 10 días para nuevas colonias aisladas. Pero, son difíciles de recuperar mediante cultivos in vitro.
Clasificación - El método tradicional de clasificación dividió a las leptospiras en aproximadamente 200 serovares basados en las diferencias antigénicas (serológicas) y todas las Leptospira patógenas fueron clasificadas como una especie, L. Interrogans; los serovares de vida libre no patógenos fueron incluidas en la especie L Biflexa. Sin embargo, la nueva clasificación del Género Leptospira se inclina sobre las relaciones genéticas del organismo por ejemplo, análisis de endonucleasa de restricción de ADN cromosomal. Hay actualmente 7 genoespecies, 28 serogrupos y numerosos serovares y genotipos. Tres especies de Leptospira saprófitas han sido descritas.

Epizootiología
La Leptospirosis ocurre mundialmente; sin embargo, no es poco común encontrarla de forma endémica en una región geográfica particular causada por infección con sólo uno, ó varios, serovares. La Leptospira se adapto a "huéspedes reservorios primarios", los cuales comúnmente son animales salvajes. Estas mismas especies de Leptospira también ocurren en casi cualquier otro huésped mamífero como "huéspedes incidentales ó accidentales". El perro es el "huésped reservorio primario" para la L. canicola (L. canicola se encuentra en los huéspedes accidentales como ratas, mapaches, erizos, ratones de campo y zorrillos) y la L. bataviae (L. bataviae ocurre en los huéspedes accidentales como son los erizos y campañoles ó ratón de campo). Los perros además pueden infectarse con varios serovares más y servir como "huéspedes accidentales ó incidentales". Históricamente, los serovares asociados con la enfermedad clínica en el perro incluían a L. canicola y L. Icterohaemorrhagiae (el huésped reservorio primario es la rata; los huéspedes incidentales son ratones, mapaches, zarigüeyas, puercoespines, zorros, marmotas, zorrillos, y ratón almizclero). Sin embargo, la idea que se teníia de la enfermedad en el Noreste de USA cambió cuando cientos de casos de leptospirosis fueron reportados en Long Island, Nueva York (USA) en 1996. Desde entonces, ambos L. Grippotyphosa (el huésped reservorio primario es el ratón de campo; huéspedes incidentales son ratones, ratas, mapaches, zarigüeyas, zorros, ardillas, zorrillos, puercoespines, rata almizclera, topo) y L. pomona (los huéspedes reservorios primarios son bovinos y porcinos; los huéspedes incidentales son ciervo, ratón, mapache, zarigüeya, puercoespín, zorro, marmota, ratón de campo) se han convertido en más prevalente en esa región. La L. Bratislava (reservorio primario en cerdos y caballos) emergió en el 2000 como un problema adicional. La prevalencia/incidencia reportada de leptospirosis en perros podría estar subestimada, porque aparentemente la enfermedad canina es subdiagnosticada ya que muchas infecciones son asintomáticas. Además, muchos veterinarios no han incluido leptospirosis en el diagnóstico diferencial de enfermedad renal aguda, ó los dueños no han buscado ayuda veterinaria. Debería reconocerse que la seroconversión no siempre se correlaciona con la enfermedad clínica declarada en el perro. Las leptospiras no se multiplican fuera de la especie animal huésped, pero sobreviven bien en un ambiente con óptimas condiciones, como se dijo anteriormente. Con respecto a la ocurrencia de infección directa, los perros deben estar expuestos a leptospiras por orinas infectadas, vía transplacentaria y ruta venérea, heridas por mordedura, ó ingesta de carne contaminada. La fuente más común de leptospirosis en perros es el agua contaminada. La transmisión indirecta además ocurre desde vegetación, suelo, ó comida contaminada por orina infectada.

Patogénesis
El entendimiento de la patogénesis de la leptospirosis es incompleto. Las formas clínicas de la enfermedad se ven influenciadas por diversos factores, incluyendo el huésped, el cual puede ser el huésped reservorio primario ó un huésped incidental. La enfermedad en huéspedes reservorios primarios tiende a ser más crónica, ó asintomática con una débil respuesta de anticuerpos. En contraste, la enfermedad en un huésped incidental tiende a ser aguda y severa con marcada respuesta de anticuerpos. El espectro de enfermedad en el perro va desde subclínico, a subagudo, agudo (severo), ó crónico; puede además haber aborto con ó sin placentitis.
Inicialmente, las leptospiras penetran las membranas mucosas ó piel intacta ó raspada. Luego, durante los 4 a 11 días próximos, los organismos rápidamente invaden el torrente sanguíneo, creando una leptospiremia. La leptospiremia temprana se asocia con los signos clínicos de fiebre, anemia transitoria debida a la hemólisis, leucocitosis, hemoglobinuria y albuminuria. En perros susceptibles, las leptospiras usualmente establecen una septicemia y se esparcen sistemáticamente a los órganos internos, incluyendo el hígado y riñones, ó a la placenta y feto. El desarrollo extensivo de lesiones especificas depende del serovar particular y su virulencia, así como también del estado inmune del perro. Si un perro ha sido vacunado, probablemente aun tenga anticuerpos en su suero, ó puede montar una respuesta anamnésica ante la ausencia de anticuerpos.
Los factores de virulencia de Leptospira descritos incluyen factores de adherencia asociados con proteínas de superficie (OSP) que le permiten adjuntarse a la fibronectina y colágeno del huésped, así como también factores desconocidos que le permiten la invasión a través de las membranas mucosas ó piel húmeda y ablandada. Los factores adicionales incluyen la actividad endotóxica del lipooligosacarido (LOS) de Leptospira y su acción sobre monocitos; liberación de linfocinas, desencadenando la reacción de coagulación intravascular diseminada (CID), incluyendo hemorragia y sangrados anormales; trombocitopenia y agregación plaquetaria; el acumulo de LOS presente; la actividad del lípido A de LOS y sus efectos tóxicos; LOS y sus efectos protectores contra los efectos bactericidas del suero normal; varias hemolisinas y su acción causando hemoglobinuria, anemia hemolítica, y otros daños tisulares; esfingomielinasa C; fosfolipasa A y otras citotoxinas. La L. icterohemorrhagiae usualmente causa fiebre, hemorragia, anemia, e ictericia; mientras que una severa insuficiencia renal aguda y/o hepatitis crónica activa es común por L. grippotyphosa, resultando en una enfermedad mucho más severa que aquella causada por L. pomona. Las infecciones por L. pomona son a menudo subclínicas, pero es común un estado portador crónico. La infección del perro con el huésped adaptado L. canicola comúnmente resulta en una nefritis intersticial crónica (Fig. 2a y Fig. 2b).

Figura 2a. Nefritis intersticial y fibrosis como resultado de una infección crónica con L. canicola. A la izquierda: superficie renal; áreas más claras representan fibrosis; sobre la derecha: corte de superficie del mismo riñón.

Figura 2b. Nefritis intersticial y fibrosis como resultado de una infección crónica con L. canicola. Riñón normal (izquierda), riñón enfermo (derecha).

Los perros jóvenes no vacunados, ó cuyas madres no fueron vacunadas, se encuentran en un mayor riesgo de enfermedad severa y muerte que podría ocurrir debido a una septicemia aguda ó anemia hemolítica. Los perros de mayor edad, previamente vacunados, que luego se infectan naturalmente con una cepa homóloga al serovar de la vacuna generalmente tienen signos clínicos mínimos.
Durante el período de invasión tisular podría ocurrir necrosis hepática como así también capilar y daño de células endoteliales. Como consecuencia, hemorragias petequiales podrían ocurrir en el parénquima renal junto con daño vascular, nefritis intersticial focal (Fig. 3), anoxia anémica, y nefrosis hemoglobinúrica. A esta altura puede ocurrir la muerte debido a la falla renal causada por una nefritis intersticial.

Figura 3. Nefritis intersticial aguda-subaguda; apariencia microscópica. Infección por L. canicola (Tinción H&E, x25).

Hacia el final del estadio de bacteremia, 7 - 10 días pos-infección, la fiebre normalmente baja y las leptospiras desaparecen del torrente sanguíneo a medida que emergen los anticuerpos. La recuperación ocurre a medida que se incrementan los anticuerpos en sangre y la bacteremia finaliza; la velocidad de recuperación depende del grado de daño visceral. Las leptospiras que se han localizado en los túbulos renales (Fig. 4), ojo, ó tracto reproductivo están protegidas de los efectos bactericidas de los anticuerpos; por lo tanto una leptospiuria persistente puede desarrollarse, con episodios periódicos de fiebre.

Figura 4. Leptospiras (oscuro, organismo espiral alargado) localizado en túbulos renales. Caso agudo. L. canicola. Tinción de plata. X40.

La emisión de orina infectada puede durar por períodos prolongados, pero los niveles de anticuerpos eventualmente declinan ya que las leptospiras, protegidas en los túbulos renales, no estimulan la producción de anticuerpos. Eventualmente, los perros recuperados pero excretando, pueden ser seronegativos al analizarse, sin embargo, los organismos continúan multiplicándose y persisten.

Signos clínicos
La severidad de los signos clínicos se ve influenciada por la edad del perro, estado de vacunación, la virulencia inherente de un serovar de leptospira en particular, como así también la ruta y el grado de exposición. En la enfermedad peraguda a subaguda, los perros pueden morir sin la presencia de signos clínicos. Estos perros comúnmente se presentan con pérdida de apetito, fiebre 103 - 104ºF (38.5 - 40ºC), severa mialgia y rehusan moverse, rigidez, temblores, debilidad progresiva y depresión. Los perros probablemente vomiten (Fig. 5) y/ó tengan diarrea lo cual resulta en una rápida deshidratación y sed excesiva. La inyección de membranas mucosas es típica, a menudo con petequias y hemorragias equimóticas extensas; la ictericia (Fig. 6) no es común, y ocurre con mayor frecuencia en perros infectados con L. icterohemorrhagiae.

Figura 5. El vómito es común en casos agudos de leptospirosis.




Figura 6. Los perros con leptospirosis pueden presentar ictericia, especialmente en casos agudos e infectados con L. icterohemorrhagiae.

Los perros normalmente tienen conjuntivitis y la membrana mucosa oral congestionada. Además puede haber una tos seca y espontánea acompañada con dificultad respiratoria. Incluso, pueden orinar con frecuencia, a menudo con hematuria y, luego, puede ocurrir anuria. Además puede presentarse hematemesis, hematoquezia, melena y epistaxis; eventualmente los perros infectados pueden tener las extremidades frías y, finalmente, la muerte en casos no tratados. Los perros con enfermedad aguda además pueden presentar una deposición grisácea, piel y ojos amarillentos, y desarrollar pérdida de peso crónica. En casos crónicos, puede ocurrir que no exista enfermedad aparente, ó sólo se presenta fiebre de origen desconocido y leve a severa conjuntivitis ("ojos rojo").

Inmunidad hacia la infección
Los perros en diferentes partes del mundo posiblemente se ven infectados por muchos serovares diferentes, pero la prevalencia local varía. Las vacunas actualmente utilizadas en perros en la mayoría de los países contienen los serovares L.canicola y L. icterohaemorrhagiae. En vacunas más recientes L. grippotyphosa y L. pomona han sido agregadas. El desarrollo de la inmunidad protectora hacia leptospirosis se cree que está asociada con la opsonización y anticuerpos bactericidas dirigidos hacia LOS y antígenos protéicos asociados. Vacunas más viejas pueden producir inmunidad la cual es adecuada para suprimir la invasión sistémica por serovares homólogos, pero no para prevenir la colonización renal de un perro, resultando en un estado portador renal. La localización de leptospiras en los túbulos proximales renales, y su supervivencia en el fluido cerebroespinal (CSF) y humor vítreo del ojo en algunos animales infectados, refleja la inhabilidad de los anticuerpos para penetrar en aquellos sitios sin causar inflamación. Debería reconocerse que la protección por vacunas es serovar especifica y, en menor extensión, a un serogrupo específico. La protección contra leptospirosis esta relacionada al nivel de anticuerpos aglutinantes y/u opsonizantes de anticuerpos. A pesar de la disponibilidad de las vacunas por varias décadas, la duración de la inmunidad inducida por la vacuna no se conoce puesto que no existen los estudios de largo plazo. La prueba serológica para la leptospirosis más utilizada es la aglutinación microscópica de Leptospira (L-MAT). Detecta bien la respuesta de IgM, pero no es tan eficiente para detectar respuestas de IgG. La declinación de títulos L-MAT a menudo comienza aproximadamente 16 semanas pos-vacunación, pero títulos más bajos probablemente no indiquen falta de inmunidad, ya que una respuesta anamnésica puede ser suficiente para engendrar protección contra la enfermedad clínica. La protección aportada por bacterinas de célula completa es corta (anecdóticamente, alrededor de 9 meses) sugiriendo que perros con alto riesgo de infección requieran refuerzos al menos dos veces al año. Como se indicó anteriormente, la pregunta si vacunar ó no a un animal debe considerar los serovares de leptospira en una región en particular y determinar que en la vacuna se encuentran los serovares apropiados. Como con otras bacterinas, las reacciones adversas a la vacuna pueden ocurrir probablemente debido a los efectos de LOS de leptospira el cual es diferente en estructura de otros LPS bacterianos Gram negativos.
La investigación actual sobre vacunas está enfocada hacia los productos de la subunidad y su objetivo es determinar que fracción ó fracciones de la pared celular de la leptospira son inmunogénicas y protectoras sin ser tóxicas al animal. Una vacuna ideal reduciría el índice de reacciones adversas, y así mismo produciría protección contra ambos serovares homólogos y heterólogos.

Diagnóstico
El diagnóstico de leptospirosis en perros depende de la detección de leptospiras en especímenes clínicos y/o demostrando un aumento del título de anticuerpos hacia uno ó más serovares de leptospira. Es poco probable que las infecciones subclínicas sean diagnosticadas. Los diagnósticos diferenciales de enfermedad peraguda ó aguda en el perro incluyen enfermedad por gusanos cardiacos (dirofilariosis), anemia autoinmune hemolítica, bacteremia (debido a heridas por mordedura, prostatitis, enfermedad dental), hepatitis infecciosa viral canina, neoplasia hepática, trauma, Lupus, fiebre maculosa de las Montañas Rocosas, Ehrlichiosis, toxoplasmosis, neoplasia renal, y cálculos renales. Los diagnósticos diferenciales de enfermedad crónica, por ejemplo, aborto, síndrome del cachorro débil, incluyen brucelosis canina, infección canina por herpesvirus y distemper. Los análisis de laboratorio incluyen perfiles químicos hematológicos y del suero, urianálisis, serología y estudios bacteriológicos y virales de especímenes apropiados.
Serología - La actual prueba de diagnóstico "óptimo estándar" para leptospirosis es la prueba microscópica de aglutinación para Leptospira (L-MAT) realizado durante el estadio agudo de la enfermedad; un segundo suero (convaleciente) debería obtenerse dentro de las 3 ó 4 semanas. La serología para Leptospira es imprecisa, pero se pueden hacer generalizaciones con respecto a la interpretación del resultado de L-MAT. Los anticuerpos son detectados por primera vez entre el día 7 - 10 pos-infección en el perro. En perros no vacunados los títulos inicialmente pueden ser bajos, 1:100 a 1:200, pero pueden incrementarse en la muestra convaleciente a 1:800 a 1:1600 ó estar más elevados si se utiliza como antígeno un serovar homólogo de Leptospira. En animales vacunados, títulos agudos de niveles menores (>1:400) son encontrados a menudo, pero dependen de cuando el perro fue vacunado por última vez. La respuesta a la infección en animales previamente vacunados generalmente resulta en respuestas anamnésicas sólo para el serovar homólogo. En general, un aumento cuádruple en el título de anticuerpos a un serovar de Leptospira es considerado significativo. Cuando los títulos a un serovar específico alcanzan niveles mayores, por ejemplo, 1:3200 a 1:6400, no es raro ver títulos elevados contra otros serovares, lo cual es probablemente sea debido a reacciones cruzadas. Para comparaciones exactas, todas las muestras de suero deben analizarse al mismo tiempo. El tratamiento antimicrobiano afecta adversamente el desarrollo de los títulos de anticuerpos. Debido a esto, las primeras muestras de suero deben obtenerse antes de iniciar el tratamiento con antibiótico.
Análisis de orina por microscopio de campo oscuro versus anticuerpos fluorescentes (FA) - A menudo el examen de orina con microscopio de campo oscuro es inconcluso. Es difícil de leer, y requiere orina fresca a fin de poder observar células de leptospira intactas. En contraste, el examen del sedimento de orina centrifugada mediante FA es una prueba más definitiva y las leptospiras no necesariamente deben estar viables. La orina debe ser entregada al laboratorio refrigerada adecuadamente de un día para otro para asegurar que la muestra es de buena calidad. Es esencial correlacionar los resultados de FA con la historia clínica y de vacunación ya que las leptospiras son comúnmente vistas en la orina de perros portadores seronegativos y en perros con enfermedad clínica tan temprano como 1 semana pos-infección.
Cultivo - El cultivo antemortem de fluidos corporales (orina, sangre, humor acuoso) y el cultivo de tejidos posmortem (riñón, hígado, feto, placenta) no es práctico debido a lo engorroso de la enfermedad. Si el cultivo se va a intentar, los veterinarios deberían contactar su laboratorio diagnóstico para utilizar el medio de transporte correcto para Leptospira.
Prueba de FA - FA debería realizarse en todos los tejidos entregados para estudios posmortem, especialmente importantes son las muestras de riñón e hígado.
Reacción en cadena de polimerasa (PCR) - Con la aparición de la prueba de PCR, la detección rápida de género y serovar específico de leptospiras a paratir de especimenes clínicos debería ser posible. Este método está siendo más utilizado en laboratorios de diagnóstico y permite una identificación precisa y rápida.
Histopatología - Tinciones especiales, por ejemplo, tinción de plata de Warthin-Starry ó por inmunohistoquímica, utilizando anticuerpos monoclonales, deben ser realizados en secciones fijadas en formalina de tejido renal, hepático, y feto/placentario.

Tratamiento y control
El propósito ó fin del tratamiento de casos agudos de leptospirosis canina es el control de la infección antes de que se produzcan los daños irreparables al hígado y riñones, y suprimir la leptospiuria. Casos severos y agudos requieren un alto grado de cuidados de soporte para la supervivencia; la pronta administración de fluidos es esencial. El pronóstico es reservado para pacientes con falla renal aguda y/o enfermedad hepática. Los dueños deben ser advertidos de que la leptospirosis es una enfermedad zoonótica que se disemina principalmente por orina de perros infectados. La zona de habitación y áreas externas de un perro infectado necesitan ser tratadas con desinfectantes apropiados. Además, los perros deben evitar, aguas estancadas lodosas y roedores. El control de roedores debe instituirse. La vacunación (ver arriba) se recomienda en áreas endémicas.
Los perros usualmente se recuperan después de 2 semanas, si son tratados prontamente con antibióticos y fluidos endovenosos. Sin embargo, si el daño renal ó hepático es severo la infección puede ser fatal.
Un tratamiento exitoso depende de una evaluación de la severidad de la enfermedad del perro. La terapia antimicrobiana inicial, donde hay evidencia de disfunción renal y/o leptospiremia, debería incluir el uso de penicilina G procaina (40,000 a 80,000 unidades por kg, IM, una vez al día, ó en dosis divididas, dos veces al día) hasta el retorno de la función renal. También pueden utilizarse fáarmacos alternativos en lugar de penicilina, como ampicilina ó amoxicilina. La eliminación de leptospiras del tejido intersticial renal a fin de controlar el estado portador se logra mejor utilizando dihidroestreptomicina (10 a15 mg per kg, IM, dos veces al día por 2 semanas) ó estreptomicina; sin embargo estos fármacos no están disponibles en los Estados Unidos para una terapia de rutina. La doxiciclina no está formalmente aprobada, pero una administración oral de 5.0 mg por kg una vez al día ha sido propuesta. Los aminoglicósidos no pueden utilizarse en pacientes hasta que se restablezca la función renal.
Por lo tanto los métodos de control deberían incluir vacunación, especial atención a sanidad de perreras para eliminar el contacto con fuentes potenciales de orina infectada; conocimiento de que los perros en mayor riesgo son las razas de caza, perros de exhibición, y otros perros con acceso a aguas como lagunas; instituir un control sobre roedores en toda la vivienda y en las perreras.